腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）凭借其组织特异性高、免疫原性低、安全性好等优势，已成为基因治疗的主流载体好物推荐。然而，大约 30–60 % 的人群及 70–90 % 的实验猴体内存在针对多种 AAV 血清型的中和抗体（NAbs）[1]。AAV中和抗体可显著降低体内基因转导效率，甚至导致疗效受限。在临床与药效学研究开始前，检测受试者或模型动物是否携带 AAV-NAbs 已成为必备环节，对评估临床或临床前试验中AAV血清型的适用性和基因治疗的疗效具有指导意义。
图-1：中和抗体阻断AAV转导示意图[1]
派真生物依托成熟的细胞转导抑制法(Luciferase 报告基因体系)面向科研与临床前项目推出 AAV 中和抗体检测服务，助力客户选择最合适的血清型并优化给药方案好物推荐。
样本要求
血清样本好物推荐，干冰运输；
体积：≥500~1000μL；
要求：无菌，乙肝、丙肝、HIV、梅毒、EB、CMV等阴性好物推荐。
检测方法
1. 第一天：细胞铺板
将生长状态良好的细胞从细胞培养箱取出，胰酶消化转移至50ml的离心管，进行离心，收集细胞并计数好物推荐。根据所需铺孔数计算，细胞总量，进行铺板，过夜培养16-18h。
2. 第二天
2.1 样品稀释
将检测样品按一定倍数稀释好物推荐。
2.2 病毒与血清混合
将病毒与血清混合液充分混匀后，静置于37℃孵育好物推荐。
病毒与血清混合液加入细胞中，并将96孔板置于37℃孵育好物推荐。
2.3 细胞培养
将96孔细胞培养板从细胞培养箱取出，吸去病毒与血清混合液好物推荐。加入细胞培养液，置于37℃细胞培养箱，培养48h。
3. 第四天
3.1 荧光素酶测定
根据试剂盒说明书进行操作，测定化学发光数值好物推荐。
3.2 实验数据处理
实验数据处理-样品阴阳性定义
采用公式 中和抗体抑制效率=（空白实验组平均值-各实验组组值）÷空白实验组平均值 *100%计算各组数值中和抗体抑制效率好物推荐。与对照组相比抑制率达到50%以上（包含50%）的样品定义为阳性样品，将抑制率为50%以下的样品定义为阴性样品。
数据展示
图-2：某样品不同稀释倍数AAV2中和抗体检测抑制效率结果图
✳注：NT50值为该样品能产生阳性结果的最大稀释倍数
图-3：某样品不同稀释倍数AAV2中和抗体检测RLU值
图-4：某样品不同稀释倍数AAV9中和抗体检测抑制效率结果图
✳注：NT50值为该样品能产生阳性结果的最大稀释倍数
图-5：某样品不同稀释倍数AAV9中和抗体检测RLU值
派真服务优势
高灵敏度：Luciferase 报告系统好物推荐，信噪比高；
高特异性：模拟真实 AAV-NAbs 作用机制；
高通量：96-孔格式好物推荐，支持多血清型并行检测；
高稳定性：标准化 SOP 与质控体系，批间差异≤10 %好物推荐。
参考文献：
[1] Schulz M, Levy DI, Petropoulos CJ, Bashirians G, Winburn I, Mahn M, Somanathan S, Cheng SH, Byrne BJ. Binding and neutralizing anti-AAV antibodies: Detection and implications for rAAV-mediated gene therapy. Mol Ther. 2023 Mar 1;31(3):616-630.